การเปรียบเทียบวิธีการเตรียมดีเอ็นเอเพื่อตรวจหายีน hemolysin ของแบคทีเรีย Aeromonas hydrophila ที่ก่อโรคในปลานิล
Article Sidebar
Main Article Content
บทคัดย่อ
โรคติดเชื้อแบคทีเรีย Aeromonas hydrophila ที่พบในปลานิล ก่อให้เกิดความเสียหายต่อผลผลิตสัตว์น้ำ เนื่องจากการตรวจวินิจฉัยโรคใช้เวลานาน ทำให้ไม่สามารถควบคุมโรคได้ทัน การศึกษาวิธีการเปรียบเทียบการสกัดดีเอ็นเอของเชื้อแบคทีเรีย Aeromonas hydrophila ที่ก่อโรคในปลานิล โดยใช้ชุดสกัดสำเร็จและวิธีการต้มด้วยความร้อน มาใช้ในการตรวจหายีน hemolysin (hlyA) ของเชื้อแบคทีเรีย Aeromonas hydrophila เพื่อให้มีความสะดวกและรวดเร็วนั้น ผลการตรวจหายีน hlyA ของเชื้อแบคทีเรีย A. hydrophila โดยใช้เทคนิคพีซีอาร์ พบว่า คุณภาพดีเอ็นเอของเชื้อที่ได้จากการสกัดจากการใช้ชุดสกัดสำเร็จและวิธีต้มด้วยความร้อน สามารถตรวจหายีน hlyA ได้ผลผลิตพีซีอาร์ขนาด 592 คู่เบส และไม่พบ ผลผลิตพีซีอาร์จากดีเอ็นเอในเชื้ออื่น ๆ โดยความเข้มของเชื้อน้อยที่สุด (106 CFU/mL) ที่นำไปสกัดดีเอ็นเอและสามารถตรวจหายีน hlyA โดยวิธีพีซีอาร์ พบว่า มีความเข้มข้นเท่ากับ 18.8 ng/µL และมีความบริสุทธิ์ 1.84 จากการสกัดโดยชุดสกัดสำเร็จ และความเข้มข้นเท่ากับ 17.7 ng/µL และมีความบริสุทธิ์ 1.66 จากการสกัดโดยการต้มด้วยน้ำร้อน ดังนั้น ดีเอ็นเอที่ได้จากการสกัดทั้ง 2 วิธี และการใช้ยีน hlyA เป็นยีนเป้าหมาย จึงมีประสิทธิภาพต่อการนำมาใช้ในการตรวจหาเชื้อ A. hydrophila ได้ ทั้งนี้ สามารถนำผลผลิตพีซีอาร์ที่ได้ไปหาลำดับเบส และยืนยันชนิดของยีนสำหรับใช้เป็นแม่แบบในการออกแบบไพรเมอร์ เพื่อรองรับเทคนิควิเคราะห์อย่างง่ายในอนาคตต่อไป
Downloads
Article Details
ลิขสิทธิ์บทความวิจัยที่ได้รับการตีพิมพ์เผยแพร่ในวารสารวิจัยและพัฒนา วไลยอลงกรณ์ ในพระบรมราชูปถัมภ์ ถือเป็นกรรมสิทธิ์ของสถาบันวิจัยและพัฒนา มหาวิทยาลัยราชภัฏวไลยอลงกรณ์ ในพระบรมราชูปถัมภ์ ห้ามนำข้อความทั้งหมดหรือบางส่วนไปพิมพ์ซ้ำ เว้นแต่จะได้รับอนุญาตจากมหาวิทยาลัยเป็นลายลักษณ์อักษร
ความรับผิดชอบ เนื้อหาต้นฉบับที่ปรากฏในวารสารวิจัยและพัฒนา วไลยอลงกรณ์ ในพระบรมราชูปถัมภ์ เป็นความรับผิดชอบของผู้นิพนธ์บทความหรือผู้เขียนเอง ทั้งนี้ไม่รวมความผิดพลาดอันเกิดจากเทคนิคการพิมพ์
References
จิราพร เกษรจันทร์. (ม.ป.ป). กรมประมง กับ สถานการณ์ TiLV. สืบค้นจากhttp://www.kuva.or.th/seminar2017/semina09/file/03.pdf
สำนักวิจัยและพัฒนาประมงน้ำจืด. (2553). เอกสารคำแนะนำ การเพาะเลี้ยงปลานิล. ฝ่ายเผยแพร่ ส่วนเผยแพร่การประมง, สำนักพัฒนาและถ่ายทอดเทคโนโลยีการประมง, กรมประมง, กระทรวงเกษตรและสหกรณ์.
Hossain, M.J., Sun, D., McGarey, D.J., Wrenn, S., Alexander, L.M., Martino, M.E., Xing, Y., Terhune, J.S., & Liles, M.R. (2014). An Asian origin of virulent Aeromonas hydrophila responsible for disease epidemics in United States-farmed catfish. mBio, 5(3), e00848-14.
Latif-Eugenín, F., Beaz-Hidalgo, R., & María José, F. (2016). A Culture Independent Method for the Detection of Aeromonas sp. from Water Samples. Italian Journal Food Safety, 5(1), 5489.
Mamnur Rashid, M., Hossain, M.S., & Ali, M.F. (2013). Isolation and Identification of Aeromonas hydrophila from silver carp and its culture environment from Mymensingh region. Journal of the Bangladesh Agricultural University, 11(2), 373-376.
Nielsen, M.E., Hoi, L., Schmidt, A.S., Qian, D., Shimada, T., Shen, J.Y., & Larsen, J.L. (2001).
Is Aeromonas hydrophila the dominant motile Aeromonas species that causes disease outbreaks in aquaculture production in the Zhejiang Province of China?. Diseases of Aquatic Organisms, 46, 23-29.
Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., & Hase, T. (2000). Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic Acids Research, 28(12), e63.
Porteen, K. Agarwal, R.K., & Bhilegaonkar, K.N. (2007). Detection of Aeromonas sp. From Chicken and Fish Samples by Polymerase Chain Reaction. American Journal of Food Technology, 2(1), 30-37.
Rozi, K.R., & Daruti, D.N. (2018). Detection and analysis of hemolysin genes in Aeromonas hydrophila isolated from Gouramy (Osphronemus gouramy) by polymerase chain reaction (PCR). In ASEAN-FEN international fisheries symposium. Earth and Environmental Science, 137, 012001.
Wang, G., Clark, C.G., Liu, C., Pucknell, C., Munro, C.K., Kruk, T.M., Caldeira, R., Woodward, D.L., & Rodgers, F.G. (2003). Detection and characterization of the hemolysin genes in Aeromonas hydrophila and Aeromonas sobria by multiplex PCR. Journal of Clinical Microbiology, 41(3), 1048-1054.
Yousr, A.H., Napis, S., Rusul, G.R.A., & Son, R. (2007). Detection of Aerolysin and Hemolysin Genes in Aeromonas spp. Isolated from Environmental and Shellfish Sources by Polymerase Chain Reaction. Asian Food Journal, 14(2), 115-122.